Western Blot Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝 酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗 体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋 白水平的表达。 查看详情

ELISA ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 查看详情

免疫共沉淀Co-Ip 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 查看详情

蛋白质银染 在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染 查看详情

免疫荧光检测技术 免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体-抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。 查看详情

肝功能-总胆红素 血清与醋酸钠—咖啡因—苯甲酸钠试剂(咖啡因试剂)混合后，加入氯化重氟苯磺酸(重氮试剂)，生成紫红色偶氮胆红素，最后加入强碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素。醋酸钠缓冲液保持偶氮反应的pH；咖啡因试剂中苯甲酸钠—咖啡因促进未结合胆红素溶解，破坏游离胆红素分子内的氢键，加速与重氮试剂的偶联反应；叠氮钠(或抗坏血酸)可终止结合胆红素的偶氮反应。反应结束后，在600nm 波长比色，从标推曲线查找总胆红素和结合胆红素含量。 查看详情

肝功能-总蛋白 凡分子中含有两个甲酰胺基（-CONH2-）的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫红色化合物这一反应称双缩脲反应蛋白质分子中有许多肽健（-CONH2-）都能起此反应，而且各种血浆蛋白显色程度基本相同。 查看详情

肾功能-尿酸 去蛋白血滤液中的尿酸在碱性溶液中被钨酸氧化成尿囊素及二氧化碳，磷钨酸在此反应中则被还原成钨兰，钨兰的生成量与反应液中尿酸含量成正比，可进行比色测定。 查看详情

心肌损伤-肌酸激酶 应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠肌酸激酶 (CK) 水平。用纯化的 大鼠肌酸激酶 (CK) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 肌酸激酶 (CK) ，再与 HRP 标记的 肌酸激酶 (CK) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 大鼠肌酸激酶 (CK) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中 大鼠肌酸激酶 (CK) 浓度 查看详情

心肌损伤-肌酸激酶同工酶 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 CK-MB 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 CK-MB 与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠 CK-MB ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值， CK-MB 浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 CK-MB 浓度。 查看详情

心肌损伤-乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶催化L-乳酸脱氢，生成丙酮酸，丙酮酸和2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸、二硝基苯腙，在磁性溶液中呈棕红色，其颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，由此计算酶的活力单位。 查看详情

肝功能-白蛋白 在pH4.2的缓冲液中，白蛋白作为一种阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿（BCG）形成蓝绿色化合物，在波长630nm处有吸收峰，其吸光度与白蛋白浓度成正比例，与同样处理的白蛋白标准液比较可求得血清中白蛋白含量。 查看详情

肝功能-丙氨酸氨基转移酶 丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸与α-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸。 丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼在酸性溶液中反应形成相应的2,4-二硝基苯腙，呈黄色，后者在碱性条件下呈红棕色。通过测定其在520nm波长处的光吸收来了解丙酮酸的生成量，借此测定血清ALT的活力，故该类方法又称比色测定法。 查看详情

肾功能-肌酐 血清（浆）中的肌酐与碱性苦味酸反应，生成黄红色的苦味酸肌酐的复合物，在 510 nm波长比色测定 查看详情

肾功能-尿素氮 在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二? 嗪，称为Feorin反应，因为二乙酰不稳定，故通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪，其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。 查看详情